【正海新知】PCR實(shí)驗室建設要求及防控建議

PCR實(shí)驗室原則上分為4個(gè)單獨的工作區域，由擴增前區到擴增后區，且要嚴格分開(kāi)。實(shí)驗材料、試劑、記錄筆、紙、清潔材料等，只能從擴增前區流向擴增后區，即從試劑制備區--樣品制備區---擴增區---擴增產(chǎn)物分析區，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗室的氣流也應從擴增前區流動(dòng)到擴增后區，不得逆向流動(dòng)。各工作區域應設置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝聯(lián)鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室，并有明顯的標志，各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連，需安裝物品 傳遞窗。每個(gè)工作區域的頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長(cháng)為254nm。

實(shí)驗室較為理想的布局模式為有一個(gè)專(zhuān)用走廊，試劑制備區，樣品制備區，擴增區和產(chǎn)物分析區很規范的排列在一起。內實(shí)驗室區域設為正壓或常壓狀態(tài)，緩沖間內設為負壓狀態(tài)，使這三個(gè)區的空氣流向由實(shí)驗區域內向外，緩沖間內通向內實(shí)驗室和走廊的門(mén)可安一種聯(lián)鎖裝置，當一個(gè)門(mén)打開(kāi)時(shí)，另一門(mén)必須關(guān)閉狀態(tài)，防止出現兩個(gè)門(mén)同時(shí)打開(kāi)的情況。

  1.試劑制備區主要是擴增試劑的配制，分裝盒保存。主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、紫外燈。

2.樣品制備區主要是樣品的混樣和測試樣品的制備。主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。根據制備樣品的性質(zhì)和要求決定操作臺是用生物安全柜、凈化工作臺、還是排毒柜，如疾控中心、臨床醫學(xué)實(shí)驗室一般選用生物安全柜，植物轉基因、檢疫等可選排毒柜。

3.擴增區是pcr擴增反應體系的配制和模板的加入，核酸擴增。加樣應在生物安全柜（超凈工作臺）內進(jìn)行，超凈工作臺的氣流方向宜選擇垂直式。核酸擴增設備為冰箱、生物安全柜、離心機加樣器、廢棄物容器、紫外燈。

4.擴增產(chǎn)物分析區是擴增產(chǎn)物的測定。若實(shí)驗僅采用全自動(dòng)擴增檢測儀，可將 區與擴增產(chǎn)物分析區合并為一個(gè)區。本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。

各個(gè)區域之間應具備單向的實(shí)驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實(shí)驗室之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結果。PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求，但是為了避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性，宜采用全送排的氣流組織形式。

實(shí)驗室的墻體，包括頂棚，應結構牢固、氣密性好；所有陰角宜采用弧形線(xiàn)條過(guò)濾；墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面，整體性好，便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。

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